Efeitos de N

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 12502 (2023) Citar este artigo

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Investigar o efeito do antioxidante N-acetilcisteína (NAC) na proliferação e apoptose em células embrionárias de Drosophila S2 que interferem no gene CG8005, eliminando espécies reativas de oxigênio intracelulares (ROS). A eficiência interferente do gene CG8005 em células embrionárias de Drosophila S2 foi verificada por PCR quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Diferentes concentrações de NAC e solução salina tamponada com fosfato (PBS) foram utilizadas para afetar as células embrionárias de Drosophila S2. O estado de crescimento das células embrionárias de Drosophila S2 foi observado por microscópio óptico. Duas sondas de dihidroetídio (DHE) e 2,7-diclorodihidrofluoresceína-acetoacetato (DCFH-DA) foram utilizadas para observar a produção de ERO em cada grupo após coloração por imunofluorescência. A coloração TUNEL e a citometria de fluxo foram utilizadas para investigar o nível de apoptose dos embriões de Drosophila S2, e o CCK-8 (Cell Counting Kit-8) foi utilizado para detectar a viabilidade celular dos embriões de Drosophila S2. A eficiência de knockdown do fragmento siCG8005-2 foi alta e estável, o que foi verificado pela eficiência de interferência (P <0,05). Não houve alteração significativa no crescimento de células embrionárias de Drosophila S2 após o tratamento de NAC em comparação ao grupo PBS. Além disso, o gene knockdown CG8005 resultou em um aumento de ERO e apoptose em células embrionárias de Drosophila S2 (P <0,05) e uma diminuição na atividade de proliferação (P <0,05). Além disso, o pré-tratamento com NAC antioxidante poderia inibir a produção de ERO em células embrionárias de Drosophila S2 (P <0,05), reduzir a apoptose celular (P <0,05) e melhorar a sobrevivência celular (P <0,05). O gene CG8005 em células embrionárias de Drosophila S2 poderia regular a proliferação e apoptose de células embrionárias S2, interrompendo a homeostase redox, e o NAC antioxidante poderia inibir a apoptose celular e promover a proliferação celular eliminando ROS em células embrionárias de Drosophila S2, o que deverá fornecer novos insights para a patogênese da infertilidade masculina e espermatogênese.

A homeostase redox intracelular, que se refere ao equilíbrio dinâmico entre espécies oxidantes e redutoras, desempenha um papel crítico na manutenção de processos fisiológicos normais, incluindo crescimento celular, metabolismo, apoptose e proliferação . Quando o corpo é submetido a estímulos nocivos, o sistema oxidativo e o sistema antioxidante ficam desequilibrados e tendem a ser oxidativos, resultando em infiltração de neutrófilos, secreção de proteases e produção de um grande número de intermediários oxidativos3,4. Espécies reativas de oxigênio (ROS) é um termo geral para compostos ativos contendo oxigênio, incluindo radical hidroxila (·OH), peróxido de hidrogênio (H2O2) e radical superóxido (O2-), que foi gerado no processo de metabolismo oxidativo5,6,7 . Sob condições normais, o corpo pode produzir uma pequena quantidade de ERO para manter o equilíbrio do metabolismo do oxigênio sob os efeitos de enzimas eliminadoras de radicais livres e antioxidantes8,9. No entanto, uma grande quantidade de ERO pode ser produzida após os estímulos nocivos, o que causa a perturbação da homeostase redox e, em última análise, contribui para a ocorrência de estresse oxidativo10. Durante os últimos anos, evidências acumuladas mostraram que o estresse oxidativo está intimamente envolvido na ocorrência de proliferação celular e apoptose. O tratamento com oxidantes pode induzir a apoptose e inibir a proliferação celular, enquanto o uso de antioxidantes pode reduzir a apoptose e aumentar a viabilidade celular11,12. A N-acetilcisteína (NAC), um precursor de antioxidante e glutationa (GSH) contendo tiol, pode atenuar o estresse oxidativo ao eliminar radicais livres e estimular a atividade de enzimas antioxidantes13,14. Há relato de que o uso de NAC também tem sido associado a uma redução significativa na peroxidação lipídica e a um aumento significativo nos níveis de GSH no fígado e eritrócitos de camundongos15.